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产品编号 : | 中文名/英文名 : 中华人民共和国农业农村部公告 第154号
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产品详细介绍:

  根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,经评价,中国动物卫生与流行病学中心和青岛立见诊断技术发展中心研制的非洲猪瘟病毒荧光检测试剂盒符合要求,现发布该制品制造及检验试行规程、质量标准、说明书和内包装标签,自发布之日起执行。

  【作用与用途】用于全血、血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肺、肌肉、环境样品等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

  1.1.2病死猪剖检样品或屠宰场剖检样品无菌采集死猪的脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品。2~8℃低温运至实验室用于检测。

  1.1.3病猪污染的周边环境采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水样品。2~8℃低温运至实验室用于检测。

  1.2.1脾、肺、肾等组织样品处理方法取适当大小的组织块放入盛有PBS缓冲液的研磨管中,6000r/min震荡研磨45秒,制成约10%的组织匀浆液,5000r/min离心5分钟,取200μl上清液进行核酸提取。

  1.2.2粪便、饲料样品处理方法取适量的粪便、饲料放入盛有PBS缓冲液的研磨管中,6000r/min震荡研磨45秒,制成约10%的匀浆液,5000r/min离心5分钟,取200μl上清液进行核酸提取。

  1.3样品核酸提取采用DNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的核酸。低温保存待检。

  1.4PCR扩增将试剂盒置室温使荧光PCR预混液、阴性对照和阳性对照完全溶解,并混匀。取18μl荧光PCR预混液至每个反应管内,然后加2μl所提取的样品核酸,每个反应总体积为20μl。每次检测应设立阳性对照和阴性对照。在荧光PCR仪上进行扩增检测。

  37°C孵育2分钟,95°C预变性5分钟;95°C变性15秒,58°C退火延伸1分钟,45个循环,在每一循环的58°C时收集FAM荧光信号。

  2.1阳性对照的Ct值应<30且出现特异性扩增曲线,阴性对照应无Ct值或Ct值≥40且无特异性扩增曲线,试验结果有效;否则应重新进行试验。

  2.2被检样品Ct值<40且出现特异性扩增曲线,判为阳性;当无Ct值或Ct值≥40,判为阴性。

  (2)使用前应将荧光PCR预混液、阴性对照和阳性对照完全溶化,充分振荡混匀,瞬时离心,尽量吸取液体上层。


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